图示为D/RNA Circular Ligase催化长度为89个碱基的单链DNA在分子内5＇和3＇端连接成环后产物的10% PAGE变性胶图。

货号与规格：B4001-10ku

D/RNA Circular Ligase是T4 RNA Ligase 1的改进版，具备很好的热稳定性，可高效地催化单链的DNA或RNA分子内环化(intramolecular ligation)。

具体特征：

1）待环化的单链DNA/RNA模板的5＇端需含有 -PO₄^3-，3＇端需为 -OH；

2）反应缓冲液中需添加ATP和Mn²⁺；

3）可环化长度超过30个碱基的单链DNA/RNA序列，对于较长（几百碱基）的序列，可咨询技术人员提升环化效率；

4）最佳反应温度在58-62摄氏度；

5）D/RNA Circular Ligase中无可检测到的kinase、DNase、RNase等酶活性；

6）具有等同于CircLigase（EpiCentre）的活性。

保存缓冲液：50% glycerol，50 mM Tris pH 7.5， 100 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，0.1% Triton X-100。

10X反应缓冲液：0.5 M MOPS pH 7.5，0.1 M KCl，50 mM MgCl₂，10 mM DTT。在最终的1X反应体系中，需补充ATP至终浓度为0.05 mM，补充MnCl₂至终浓度为2.5 mM。

Unit定义：1个unit的D/RNA Circular Ligase可催化1 pmol的长度为89个碱基的DNA模板序列在60度下1小时内成环，产率为40-50%。

产品规格：10000 units溶解在100 uL缓冲液中，浓度为100 units/uL。

说明及注意事项：

1）通常若反应体系过小，不建议使用大量的DNA或RNA模板。对于20 uL的反应体系，建议使用10 pmol以下的DNA/RNA；

2）若反应模板量较大，可增大反应体积。原则上来讲，反应体积越大，DNA/RNA浓度越低，越有利于intramolecular ligation；

3）若某些特定序列成环效率较低，可适当增加D/RNA Circular Ligase的用量，并延长反应时间至3-4小时。不建议过夜反应，在MnCl₂存在的情况下，长时间反应可能造成DNA/RNA损伤或降解。